CUT&Tag
CUT&Tag
产品分类：
CUT&Tag由美国 Fred Hutchinson 癌症研究中心的 Steven Henikof 团队开发，并于2019年通过一篇发表在 Nature Communication 上的文章向公众介绍。CUT&Tag技术的关键在于利用一种特殊的融合蛋白——pA/G-Tn5。该蛋白能将Protein A/G（能高效结合抗体）与Tn5转座酶（能切割DNA并同时加上测序接头）的功能融为一体。 其核心流程可以概括为：特异性抗体引导pA/G-Tn5融合蛋白精准定位到目标蛋白所在的染色质区域，随后激活Tn5酶，使其在目标位置原位切割DNA并同时添加测序接头，从而直接完成测序文库的构建。
相比较传统方法（ ChIP-seq和CUT&RUN），CUT&Tag 将 MNase 替换为pA-Tn5 转座酶，激活后同时切割 DNA 并插入测序接头，省去传统建库的末端修复、加 A、接头连接步骤，实现 “一步建库”。
1、组蛋白修饰研究（共修饰分析、动态修饰变化、新型修饰）；
2、转录因子结合位点互作研究（基因转录调控的具体机制、探究转录因子结合位点的分布规律、转录因子之间的合作规则）；
3、单细胞/类器官/组织的表观调控研究：不同层面解析表观标记的时序变化和驱动机制；
4、多组学交叉验证（如RNA-seq + CUT&Tag，关联表观调控与基因表达变化）
注：转录因子需提供ChIP级一抗,常用组蛋白修饰的抗体可用公司自备抗体。
自行购买的抗体，寄送前务必与抗体公司确认邮寄方式，根据抗体保存条件确定录样组织类型。
MLF1作为促衰老表观调控因子，通过招募EP300调控染色质开放，加剧心肌细胞衰老和年龄相关心脏肥大（AACH）的机制
文章题目：Downregulation of MLF1 safeguards cardiomyocytes against senescence-associated chromatin openingDownregulation of MLF1 safeguards cardiomyocytes against senescence-associated chromatin opening
期刊：Nucleic Acids Research（Q1,IF=13.1）
研究内容：文章利用ATAC-seq、CUT&Tag和RNA-seq联合分析定位核心通路：MLF1是AACH的关键促衰老因子，其通过以下机制发挥作用：MLF1结合到IL-1B、p21等衰老基因的启动子区，招募EP300 促进H3K27ac沉积，增加染色质可及性，激活靶基因转录，最终加剧心肌细胞衰老和心脏肥大；靶向MLF1或EP300可能成为延缓心脏衰老的新策略。
实验设计：以雄性 C57BL/6 小鼠、AC16 人心肌细胞等为研究对象，通过细胞与动物水平实验，结合测序技术与功能验证，明确 MLF1 是 AACH 的促衰老表观遗传调控因子。RNA-seq检测 MLF1 敲低 / 过表达后 AC16 细胞的差异表达基因（3个生物学重复）；ATAC-seq分析 MLF1 敲低后 AC16 细胞的染色质可及性变化（3个生物学重复），聚焦衰老效应因子启动子区域；CUT&Tag检测 MLF1 敲低后 AC16 细胞的MLF1/EP300 结合及 H3K27ac 沉积（3个生物学重复、anti-MLF1、anti-EP300和anti-H3K27ac抗体）。
相关产品
产品留言
微信公众号